没有什么比细胞无法生长或细胞培养物无法附着更让人抓狂的了。细胞生长迟缓和不稳定的培养行为会拖延项目，挫败团队，让研究人员想知道哪里出了问题，如何解决。
这些问题的解决方法并不总是那么简单。细胞培养是复杂的，并且需要时间来分离过程和隔离问题。一般来说，最常见的问题包括异常生长模式或斑点状、不均匀或不一致的细胞附着。其他问题包括增长速度缓慢或突然变化或无法解释的结果。
这些问题往往与培养技术、孵化和培养基有关。让我们来探讨其中的几个痛点，以及如何通过良好的实践来预防它们的影响。
检查技术
当细胞培养出现问题时，首先要评估的是你的处理技术。例如，饲养培养可以使它们暴露在污染中，这是一个普遍而严重的问题。不正确的混合和移液也会导致问题:
- 处理不均匀或混合不足细胞的接种物可引起泡沫或气泡，可阻碍细胞生长和附着，并在血管上留下斑点。小心地倒入或移液介质，以确保材料无气泡。
- 静电可破坏塑料容器中的细胞附着，特别是在低湿度地区。打开包装时，尽量不要使容器与包装摩擦。擦拭容器外部或使用防静电设备也可以阻止静电。
- 细胞培养液不足会导致血管两侧生长加重。在补充培养物时使用过少的培养基也会造成同样的后果。
- 旋转的速度辊子瓶会导致严重的生长或结块。将启动速度设置在每分钟半转到每分钟一转之间，根据需要进行调整。保持滚轮清洁，防止滑倒或失速。
当你看到不均匀或不正常的细胞附着或生长模式时，你通常可以知道有些事情出了问题。为了最好地发现这类问题，用戊二醛或乙醇固定样品培养，然后在观察前染色。
孵化问题
尽管使用培养箱的目的是尽量减少环境因素，如温度变化，许多变量仍然会影响生长速度和培养活力:
- 温度变化实验过程中反复打开培养箱时发生;容器堆放的方式和地点也会引起温度的变化。除非万不得已，否则不要打开培养箱，把关键培养物放在后面。再考虑一下盘子堆放的位置效应;最低的盘子离金属架子最近，所以它们加热得更快。
- 蒸发影响细胞生长速率和模式;尽量减少它通过保持水库充满，并通过加湿进入的气体煤气洗涤缸．
- 振动可引起不同寻常的细胞生长，如同心细胞环。振动可能来自培养箱中松散的风扇电机或任何来源，如行人或机动设备。保持培养箱在坚固的表面，没有任何其他设备震动。
其他环境预防措施，如保持培养箱水平和没有有毒杂质，对正常生长也是必不可少的。
指责媒体
媒体缺陷并不总是可见的，许多因素-如试剂质量不足，缓冲液和过滤，甚至荧光毒性-影响介质的功能。
除了确保你在研究中使用正确的配方和购买高质量的材料之外，测试介质功能的最好方法是实验。将有问题的介质与来自其他制造商的相同介质进行比较。如果新媒体产生了相同的结果，您可能有技术或孵化问题。
像科学家一样思考
如果你的技术和治疗不正确，你的活细胞培养就会受到影响。虽然一个一个地分离变量可能很耗时，但这样做通常能最好地洞察出了什么问题以及为什么出错。
像处理其他研究问题一样处理异常细胞生长:假设、测试和分析。用不了多久，你就会知道如何让这些宝贵的细胞存活下来，而你的研究也会走上正轨。
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