酶控制
细胞色素P450形态特异性代谢的分析需要使用适当的对照制剂,以消除由细胞系原生酶代谢的可能性。康宁生命科学使用与制备其他微粒体产品相同的程序制备对照微粒体和细胞质。
对于P450酶,对照微粒体可从Sf9和High Five (Hi5或BTI-TN-5B1-4)昆虫细胞制剂中获得。所有昆虫细胞控制微粒体都是从感染野生型杆状病毒的昆虫细胞制备的。
蛋白质浓度正常化
总蛋白浓度的差异会影响底物的自由浓度,从而影响酶动力学。对于那些具有与蛋白质非特异性结合的巨大潜力的底物,可用底物浓度可能显著低于最初的假设(J. Pharmacol。[1997];药物金属底座。《处置》25:1359[1997])。总蛋白浓度可以通过添加对照微粒体来控制和归一化。
NADPH再生系统
NADPH是许多异种生物代谢反应的必要辅助因子。NADPH是测量由P450s、FMOs、NADPH- p450 OR和许多其他氧化酶催化的氧化酶活性所必需的。氧化酶测定中NADPH的一个常见来源是NADPH再生系统,它产生NADPH原位使用酶促反应。例如,葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PDH)会在底物葡萄糖-6-磷酸(Glc-6-PO4)存在时将NADP+转化为NADPH。
康宁genest™NADPH再生系统由两种试剂组成,溶液A (NADP+和Glc-6-PO4)和溶液B (G6PDH)。每种试剂单独出售。结合起来,这两种试剂形成了一个NADPH再生系统,可用于所有需要氧化酶检测的NADPH (cdna表达酶和肝脏部分)。使用A和b溶液各一小瓶,可以进行至少200到400次酶测定。可进行的测定总数取决于研究人员的实验设计。